伊红染色液的配制与优化指南，实现最佳染色效果

伊红染液分为水溶性和醇溶性两种，各有优劣。水溶性伊红染色效果稳定、易于掌握，且分化宽容度较大，但染色鲜艳度略逊于醇溶性伊红。相比之下，醇溶性伊红染色效果更为鲜艳，与苏木素对比更为清晰，更符合医生观察需求。然而，其染色效果不够稳定，掌握难度较高，且液体挥发快、经济性稍差，分化过程也相对困难。特别需要注意的是，分化过程中对乙醇浓度的要求极高，否则可能出现分化不足与过度分化在短时间内交替出现的情况。

另外，病理科有时采用水溶性伊红经过处理后用乙醇溶解的方法来改善染色效果。具体操作如下：将水溶性伊红溶解于蒸馏水中，加入浓盐酸搅拌后静置过夜并过滤。过滤后的沉淀物经过蒸馏水冲洗和干燥后，再加入95%乙醇配成饱和液。使用前，只需用95%乙醇按1:1至2倍的比例稀释，并加入1%至2%的冰醋酸即可。据说，采用此法配制的醇溶性伊红染色液具有较长的使用期和快速的染色速度。结合正确的染色技巧，切片分化不易脱色，颜色清晰且与蓝色细胞核对比鲜明，长期保存也不易褪色。但在实际应用中，有时会出现配制的醇溶性伊红染色液使用期短、染色困难或易褪色等问题。

❒ 溶剂选择的影响

在室温条件下，醇溶性伊红在95%乙醇中的溶解度相对较低，远低于相关文献中记载的0.45g/100ml。这可能与染料的具体生产工艺有关。因此，直接在室温下配制染色液往往无法达到预期的浓度，导致切片染色结果偏淡。在苏木精染核后，若未采用流水冲洗蓝化，切片中残留的酸或碱性物质可能导致伊红褪色。另外，若在水洗蓝化后直接将切片置于醇溶性伊红染色液中，由于乙醇短时间内难以完全置换组织内的水分，会导致染色不均匀。

❒ 染色液浓度的控制

酸碱度与溶解度的关系对最终染色效果的重要性。在室温条件下，醇溶性伊红在95%乙醇中的溶解度及配制时的注意事项，需特别注意冰醋酸的使用量，以维持染色液为略酸性环境。

❒ 冰醋酸的作用

适量的冰醋酸能够维持染色液为略酸性环境，其pH值稍高于胞质的等电点。这样的环境使得胞质发生电离并带正电，从而能够与带负电的伊红染料负离子结合进行染色。若不加入或仅加入少量冰醋酸，伊红染料只能通过渗透和弥散作用进行染色，其与组织的结合能力较弱，分化后容易脱色。而过量加入冰醋酸则会导致染色体也发生电离并带正电，进而影响核与质的清晰对比。

❒ 染色前后的处理要点

染色后的流水冲洗以及在85%乙醇中的分化处理，对于维持染色的一致性和防止脱色非常重要。流水冲洗的过程确保染色的一致性与溶解效果。

❒ 染液配制的优化建议

采用此法配制的醇溶性伊红染色液具有较长的使用期和快速的染色速度。结合正确的染色技巧，切片分化不易脱色，颜色清晰且与蓝色细胞核对比鲜明。在配制染色液时，需注意避免搅拌或振荡有沉淀的储备液。建议取1份储备液，按1:1或1:2的比例加入95%乙醇，并加入1~2滴/100ml的冰醋酸。

❒ 精细的染色过程管理

每个步骤的管理精细度决定了最终的染色质量，建议使用设备如恒温温水浴箱或数控裱片机等。在苏木染核后，应采用流水冲洗蓝化，这对于盐酸乙醇分化或弱碱溶液促蓝的步骤尤为关键。此外，若染色液已产生沉淀，应立即废弃，避免使用。