GAPDH、Tubulin、Actin哪个做WB内参更好？
🌸常用内参种类？
β-actin，GAPDH，β-tubulin为三大常用内参。
β-actin，肌动蛋白，细胞骨架蛋白。在各组织和细胞中的表达相对恒定，它广泛分布于细胞质内，表达量非常丰富。
GAPDH，该酶是糖酵解反应中的一个酶，几乎在所有组织细胞中都高水平表达，在同种细胞或组织中的表达量一般是恒定的，且很少受外部诱导物的影响。
β-tubulin，微管蛋白，细胞骨架蛋白，表达通常不会发生改变。
🌸如何选择合适的内参呢？
🍬目的蛋白分子量
选择内参抗体时，应该考虑目的蛋白分子量的大小。通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5KD左右。
🍬目的蛋白表达部位
有些UU提取蛋白会选择胞浆、胞核分开提取，不提取总蛋白。β-actin在胞浆中表达高效稳定，而总蛋白主要成分就是胞浆蛋白，所以β-actin可以作为总蛋白的内参。理论上细胞核内不表达β-actin，所以不能用于核蛋白内参。
胞浆和全细胞蛋白：β-actin（43KD）、GAPDH（37KD）、Tubulin（55KD）等；
胞核蛋白：PCNA（29KD）、Histone H3（17KD）等；
核膜蛋白：Lamin B（66KD）等；
线粒体蛋白：COX IV（17KD）、VDAC1（30KD）等。
🍬组织特异性
没有一种内参适用于所有组织和细胞，需根据具体情况进行选择。如：
1 在脂肪组织里，β-Actin的表达量非常低，不适合作为内参。
2 不同组织的细胞结构会有差异性，如脑组织的 tubulin 的表达会高一些，而 actin 的表达量可能会低。再比如骨骼肌、心肌和平滑肌的特殊功能反而导致了 tubulin 的表达改变和特化，这种情况可以选择GAPDH。
3 缺氧和糖尿病等疾病存在下，会增加 GAPDH 在特定细胞和组织中的表达，不适合做内参。
4 在加入抗癌和真菌药物时，tubulin表达受影响，不适合做为内参。
5 血红细胞样本就不适合常用内参，可以选用其结构性蛋白作为内参代替。
6 做诱导后或检测磷酸化等修饰性抗体时，选择Actin和Tubulin，因为 GAPDH 是代谢类蛋白，表达量有可能会受到诱导处理的影响。