菌落(液)PCR原理＋详细操作
1、PCR原理：利用双链DNA的半保留复制，高温变性解旋成单链以及低温复性成双链、碱基互补配对原则，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，耐热DNA聚合酶-Taq酶（该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活）、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
2、菌落PCR（Colony PCR）：基本原理与PCR一样。常规PCR扩增需要进行细菌培养、质粒制备等多步操作后才能进行基因扩增，操作繁琐，耗时，同时在反复的操作中DNA量损失也较大，产率较低。菌落PCR不同在于，直接以单个菌作为模板。是一种可以快速鉴定菌落是否为含目的质粒的阳性菌落。操作简单，快捷，阳性率较高，在转化鉴定中较常见。
一、菌落PCR筛选基本步骤：
1. 单菌落挑取（挑过的菌记得在培养皿外做标记）
2. 菌落PCR反应（冰上PCR溶液体系配置，PCR仪器设置）
3. DNA电泳检测
4. 判断阳性克隆并测序（注意保种）
二、菌落PCR具体操作：
拿到长斑的板子，在超净工作台挑斑；
准备6个1.5ml的管子，标记好顺序,加50uL有抗性的液体培养基；
准备个pcr管，对应的写好顺序标签，加9ul无菌水；
用枪头轻轻点在斑上，在pcr管子里吹吸混匀，在往相应编号的离心管中搅一搅，培养；
添加pcr反应液11ul至每一PCR管（管子里一共20ul），加热并离心，增加对细胞膜破坏；
6管＋1管含目的基因质粒＋1管不含质粒，全部一起做PCR；
pcr跑完后跑核酸胶，有正确条带的为阳性克隆，并取相应序号的菌液转接培养，抽取质粒并送公司测序。
注意：PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚至消失。
三、菌液PCR具体操作：
拿到长斑的板子，在超净工作台挑斑；
准备6个1.5ml的离心管，标记好顺序，加50uL有抗性的液体培养基；
用枪头轻轻点在斑上，离心管中搅一搅，培养；
准备8个pcr管，对应的写好顺序标签，添加pcr反应液和菌液（6管），和对照组（2管）一起进行PCR。
跑核酸胶电泳，转接培养，抽取质粒并送公司测序。
两种方法均可以选择，如果不赶时间，求简便可以选择菌液PCR，如果赶时间，来不及当天送测序了，可以选择第菌落PCR。
四、电泳条带结果分析~在下一篇笔记