美丽生物之荧光标记~GFP

美丽生物之荧光标记~GFP YFP RFP！

荧光标记法是生物学领域最常用的实验方法之一，而绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)是当代生物学的重要工具,因为其可视性，便捷性及突破性获得过2008年的诺贝尔化学奖。
今天我们讲一讲博士生最常用的几种荧光标记蛋白及实验。
常用实验:
BiFC实验:即双分子荧光互补实验，作为研究分子互作最简单而常见的实验，其原理是将YFP荧光蛋白分裂为两部分，分别连接两个待检测互作的目的蛋白，如果这两种蛋白互作，则在空间上拉进了YFP，使其恢复功能，在荧光显微镜下可以观察到488处的荧光。
亚细胞定位观察:将待观测蛋白前端或后端连接荧光标签，用于观察在细胞中目的蛋白的表达位置。实验室中一般会储存有常见的细胞定位marker，如内质网，高尔基体，叶绿体等，将目标蛋白和定位marker共同表达，可以通过观察融合的颜色，来确定蛋白实际的表达位置。
共定位实验:用于观察多种蛋白，以及不同处理后，蛋白的表达位置及表达状态。常用的标签有GFP(绿色) CFP(蓝色) RFP(红色)mCherry(红色)等。
免疫荧光实验:免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）是一种标记免疫的技术。将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
观察病毒侵染循环:通过改造病毒载体，可以通过在荧光显微镜及手持荧光灯的照射下，直接观察到病毒实时侵染的过程和程度。
观测仪器:荧光显微镜，激光共聚焦显微镜，手持荧光灯。
检测:除了通过仪器用肉眼观察外，还可以通过western检测来确定载体表达情况及强度差异。