植物DNA提取
从植物样本中提取DNA是分子生物学实验的基础步骤，用于后续的PCR、基因克隆、基因组测序等实验。植物细胞的特殊性在于它们具有细胞壁，这使得DNA提取比从动物细胞或微生物中提取更具挑战性。以下是一个基本的植物DNA提取过程概述：
1. 样本采集：
- 选择新鲜、健康的植物组织，如叶片、根或种子。通常会使用液氮将样品冷冻，以防止DNA降解和酶的活性。
2. 细胞破碎：
- 使用研磨器、捣碎器或珠磨机物理破碎细胞。在液氮中研磨样品直至成粉末状，这有助于打破细胞壁和细胞膜，释放细胞内容物。
3. 裂解：
- 将研磨好的样品转移到含有裂解缓冲液的试管中。裂解缓冲液通常含有去垢剂（如SDS），用于溶解细胞膜，和一定浓度的盐（如NaCl），有助于蛋白质和DNA的分离。
4. 去除杂质：
- 加入抗蛋白酶（如蛋白酶K）消化蛋白质。
- 加入CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）和NaCl，CTAB与DNA结合，有助于从多糖和多酚等污染物中分离DNA。
- 使用氯仿-异戊醇（24:1）混合液进行提取，分离有机相和水相，DNA位于水相中。
5. DNA沉淀：
- 向水相中加入等体积的异丙醇或两倍体积的乙醇，以及1/10体积的3M醋酸钠，使DNA沉淀。
6. 洗涤和干燥：
- 用70%乙醇洗涤DNA沉淀，去除残留的盐分和溶剂。
- 沉淀在室温下风干或在低温离心机中干燥，以去除乙醇。
7. 重悬和纯化：
- 将干燥的DNA沉淀重悬在适量的TE缓冲液（Tris-EDTA）或超纯水中。
- 如有必要，可以使用DNA纯化试剂盒进一步纯化DNA，去除可能影响后续实验的杂质。
8. 定量和质检：
- 使用紫外分光光度计或荧光定量法检测DNA的浓度和纯度。
- 通过琼脂糖凝胶电泳评估DNA的完整性。
以上步骤可能需要根据具体的植物种类和组织类型进行适当调整。例如，对于多酚和多糖含量较高的植物样本，可能需要额外的纯化步骤来去除这些抑制PCR的物质。此外，市售的植物DNA提取试剂盒提供了快速、标准化的提取方法，适用于不同类型的植物样本。