艾滋病检测-名医在线
问题描述：三周酶联七周金标能否排除艾滋病
张翠芬副主任医师小儿内科
太原市妇幼保健院
三甲
病情分析：艾滋病主要的检测方法有以下几种： （一）抗体检测 主要有酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫荧光试验（IFA）.ELISA用去污剂裂解HIV或感染细胞液提取物作抗原,IFA用感染细胞涂片作抗原进行抗体检测,如果发现阳性标本应重复一次.为防止假阳性,可做Westernblot（WB,蛋白印迹法）进一步确证. WB法是用聚丙烯酰胺凝胶电泳将HIV蛋白进行分离,再经传移电泳将不同蛋白条带转移于硝酸纤维膜上,加入病人血清孵育后,用抗人球蛋白酶标抗体染色,就能测出针对不同结构蛋白抗体,如抗gp,gp41,P24抗体,特异性较高. 快速检测法,也称为金标法,也是抗体检测的一种方法,根据免疫层析法的原理,用于HIV抗体检测的定性检测. （二）抗原检测 用ELISA检测P24抗原,在HIV感染早期尚未出现抗体时,血中就有该抗原存在.由于P24量太少,阳性率通常较低.现有用解离免疫复合物法或浓缩P24抗原,来提高敏感性. （三）核酸检测 用PCR法检测HIV基因,具有快速,高效,敏感和特异等优点,目前该法已被应用于HIV感染早期诊断及艾滋病的研究中. （四）病毒分离 常用方法为共培养法,即用正常人外周血液分离单个核细胞,加PHA刺激并培养后,加入病人单个核细胞诊断及艾滋病的研究中.
意见建议：1HIV的感染机制及感染标志 HIV病毒侵入人体后,其表面糖蛋白gp与细胞表面受体蛋白CD4以高亲和力结合,吸附到宿主细胞上；gp再与宿主细胞表面辅助受体相互作用,使病毒与宿主细胞膜更接近；gp41产生一系列构象变化,其N端的融合肽片段插入宿主细胞膜,导致病毒包膜与细胞膜的最终融合,病毒RNA进入细胞.在HIV感染后,最先能够监测到病毒RNA,然后是p24抗原,最后是抗体［2］. 在感染后的10～14d内,病毒RNA水平是呈指数上升,随后下降并保持在持续稳定的水平上,进入HIV无症状期［3］.p24抗原水平随着病毒RNA水平的发展而发展,在急性感染期就可以出现,被认为是病毒复制的间接标志,但由于检测方法的灵敏度不够而使得其检出时间要比RNA晚.从HIV感染到能够检测出HIV抗体这一时期,被称作“窗口期”.在窗口期,能够通过病毒RNA,p24抗原和CD4淋巴细胞水平来确定HIV感染.CD4淋巴细胞水平随着感染的发展而逐渐下降,当其在血液中细胞下降到200个/mL时,就会发生[1]严重的免疫缺陷,患者就被确诊为艾滋病.病毒RNA,p24抗原,HIV抗体和CD4淋巴细胞水平可以用来确定HIV感染,检测病情发展［4］. HIV在病毒分类中属逆转录病毒科慢病毒属中的人类免疫缺陷病毒组.迄今为止,根据血清学反应和病毒核酸序列测定,全球流行的HIV可分为2型：HIV?1型和HIV?2型［5］.在HIV?1型内,根据编码包膜蛋白的env基因和编码壳蛋白的gag基因序列的同源性又进一步分为3个组：Ｍ组（主要组）,Ｏ组（外围组）和Ｎ组（新组或非M非O组）,Ｍ组内又可分为Ａ?Ｊ10个亚型.在HIV?1型和HIV?2型之间,其核苷酸序列有45％的同源性,并且存在免疫交叉反应.应用免疫印迹法(Westblot)可以将二者明确地区别开来［6］.生活护理:近几年,国外对建立高灵敏度检测p24抗原的研究一直没有停止,如为了提高检测血清中p24抗原的敏感性,将血清中免疫复合物解离后再进行测定,发展了ICDp24抗原测定法.2003年Sutthent［27］等将免疫复合物热解离后通过TSA信号放大系统使用ELISA进行检测,使p24抗原检测的最小检出值由原来的10pg/mL降低到pg/mL,在HIV?1抗体阳性母亲所生婴儿早期的诊断中与RNA检测相当,与HIV核酸检测具有可比性,具有重要的实用价值.2004年,来自HIV病毒的发现者之一美国马里兰大学所领导的实验室的一篇高灵敏度检测p24抗原的研究论文引起了广泛的关注,p24抗原的检测成为比病毒核酸检测更灵敏的方法.2005年来自美国马里兰大学的一篇长篇综述也开始关注p24抗原的检测,认为这可以作为低成本,适合在发展中国家使用的替代现有昂贵的RNA测定方法的一种选择.
2013-11-22
